杭州質(zhì)量分離純化微球

摘要: 本發(fā)明提供了一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法。將表面偶聯(lián)有親和配基的磁性微球加入到納豆激酶的發(fā)酵液中，在室溫下緩慢攪拌充分混合，使納豆激酶特異性地吸附在磁性微球表面；采用磁鐵將吸附有納豆激酶的磁性微球從發(fā)酵液中分離出來，用緩沖溶液清洗一次去除雜質(zhì)，再用解析液進(jìn)行解析，收集到納豆激酶的洗脫液；***經(jīng)過冷凍干燥得到納豆激酶產(chǎn)品。分離后納豆激酶的活力為８５％，純化因子為６．０。本發(fā)明具有周期短、操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低且易于規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。 利要求: 一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法，其特征在于，所述的納豆激酶分離純化方法包括以下幾個(gè)步驟：（１）納豆激酶發(fā)酵液的制備從固體培養(yǎng)基上挑取納豆激酶的單菌落接入２０－１００ｍＬ的種子培養(yǎng)基中，搖床中培養(yǎng)１２－２４ｈ，按２％－６％ 接種量接入發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，在２５－３７℃下發(fā)酵罐培養(yǎng)２４－４８ｈ，液體發(fā)酵結(jié)束后，通過離心除去菌體，得到納豆激酶發(fā)酵液；（２）親和配基在磁性微球上的固定化將自制的磁性高分子微球進(jìn)行表面功能化修飾得到表面含有環(huán)氧功能基團(tuán)的磁 性微球，在５０－８０℃條件下，以氫氧化鈉為催化劑，進(jìn)行親和配基的固定化反應(yīng)，獲得表面含有親和杭州質(zhì)量分離純化微球

如何精確控制和大規(guī)?；a(chǎn)裸眼看不到的納米微球并賦予這些材料的功能， 以滿足現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)的需求是當(dāng)今納米材料科學(xué)家**重要的研究方向。納米微球 的關(guān)鍵技術(shù)問題和研究方向如下： 1） 納米微球粒徑大小徑及粒徑分布精確控制關(guān)鍵技術(shù): 納米微球的應(yīng)用非常***,不同的應(yīng)用需要不同性能的微球,很多**應(yīng)用都 對(duì)微球的粒徑大小和均一性都有極高的要求，如液晶間隔物微球和導(dǎo)電金 球都要求能精確控制粒徑大?。ㄆ骄骄瓤刂圃?0納米以下），粒徑分 布滿足變異系數(shù)小于3%,. 因此不同材料組成的納米微球的精確粒徑大小和分 布本領(lǐng)域首要解決的關(guān)鍵技術(shù)問題 2） 納米微球的孔徑大小,孔徑分布和比表面精確調(diào)控關(guān)鍵技術(shù): 在很多應(yīng)用領(lǐng)域，不僅要嚴(yán)格控制微球材料、粒徑大小、分布和機(jī)械強(qiáng)度， 還要調(diào)控微球的比表面積、孔道結(jié)構(gòu)等,如用于生物分離和分析的微球介質(zhì)和 色譜填料，微球粒徑大小、均一性、納米孔道結(jié)構(gòu)都會(huì)影響生物分子分離和 分析效果，因此如何調(diào)控微球孔道結(jié)構(gòu)，比表面積也是關(guān)鍵技術(shù)之一。蘇州分離純化微球

微球是直徑在納米和微米尺度范圍的球型粒子。球形物體是自然界存在**穩(wěn)定的物質(zhì)形態(tài)， 它是三維幾何空間理想的對(duì)稱體，也是單位體積中所有立體形態(tài)中面積**小的。自然界大 到星球如地球，小到籃球，乒乓球，玻璃珠等都是球體。 地球直徑是1.28萬千米，而籃球 直徑是0.25米，1納米等于十億分之一米，相當(dāng)于一根頭發(fā)絲橫切面的六萬分之一，如果拿 納米的微球與籃球相比，就相當(dāng)于籃球與地球之比例。 如此之小的納米微球材料卻是現(xiàn)代 產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要基礎(chǔ)。

2.3.2懸浮聚合
懸浮聚合法是單體小液滴懸浮在水中的聚合方法，在磁性粒子、穩(wěn)定劑和表面活性劑存在下、靠油溶性引發(fā)劑的作用使一種或幾種單體在磁性粒子表面聚合可將磁性粒子包裹在聚合物中。與乳液聚合相比，懸浮聚合單體液滴粒徑通常是微米級(jí)別的。Li等[17]合成一種新型的核殼式P(DVB-MAA)/Fe3O4納米復(fù)合微球，可作為分散模式的磁介導(dǎo)微觀粒子的固相萃取吸附劑。Fe3O4納米粒子通過溶劑熱法制備，P(DVB-MAA)通過懸浮聚合合成，微球的平均粒徑在300~700nm，微球殼層的P(DVB-MAA)厚度在10nm左右。該微球可用于水中微量的有機(jī)污染物的快速、高靈敏檢測(cè)。
2.3分散聚合
分散聚合是懸浮聚合的一種，也是一種特殊的沉淀聚合，反應(yīng)之前單體、溶劑、穩(wěn)定劑、引發(fā)劑等是均一的混合體系，當(dāng)反應(yīng)開始，聚合物達(dá)到一定分子量之后，聚合物逐漸從反應(yīng)體系中沉淀出來。Zhang等合成了Fe3O4含量高達(dá)70wt%、且分布比較均一的P(St–GMA)/Fe3O4的納米復(fù)合微球。由于只有當(dāng)磁性粒子在反應(yīng)初期成核過程中捕獲，并聚合增長(zhǎng)才能得到復(fù)合微球，因此此方法的磁含量往往不高，且該法需使用的溶劑多為有機(jī)溶劑，聚合物與有機(jī)溶劑的親和性導(dǎo)致聚合物沉淀出時(shí)鏈長(zhǎng)較長(zhǎng)，粒徑較大，限制了其應(yīng)用。

磁性高分子微球的制備
目前制備磁性高分子納米微球的方法主要分為五類，其主要包括：包埋法、原位法、單體聚合法、界面沉積法及自組裝法。
2.1包埋法
包埋法是將聚合物溶解在含有磁性超微粒子的溶液中，然后加入大量的沉淀劑，通過交聯(lián)、絮凝、霧化、沉積、蒸發(fā)等手段使高分子物質(zhì)沉析在磁性粒子表面形成具有核殼結(jié)構(gòu)的復(fù)合微球。高分子物質(zhì)與磁性粒子主要通過范德華力、氫鍵、螯合作用或共價(jià)鍵等作用力結(jié)合。Li等通過化學(xué)共沉淀法合成納米粒子Fe3O4磁核，以殼聚糖為包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交聯(lián)法制備了具有核-殼結(jié)構(gòu)的磁性高分子微球-殼聚糖磁性微球，并偶聯(lián)肝素配基得到了一種新型親和磁性微球。所得親和磁性微球具有較窄的粒徑分布、形狀規(guī)整，粒徑在50nm左右。將磁分離技術(shù)應(yīng)用于凝血酶的分離純化，得到了較好的效果（酶比活達(dá)1879.71U/mg，得率85%，純化倍數(shù)11.057，為傳統(tǒng)柱層析法的兩倍）。Chi?riuc等將含F(xiàn)e2+和Fe3+溶液逐滴加入殼聚糖的NaOH溶液中制的可用于負(fù)載頭孢霉素的磁性殼聚糖微球。
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前段時(shí)間科技日?qǐng)?bào)總編劉亞東列出包括芯片，飛機(jī)發(fā)動(dòng)機(jī)等在內(nèi)的35項(xiàng)中國(guó)給人卡脖子的技術(shù)， 其中微球材料也是其中之一。大多數(shù)人可能很容易理解芯片和飛機(jī)發(fā)動(dòng)機(jī)的技術(shù)難度及其重要性 ，但很少人可以理解微球?yàn)槭裁匆策@么重要這么難做。我們所熟知的宏觀球體如籃球，乒乓球， 玻璃珠是如此之普通，而微球只不過是把這些球體做到足夠“小”而已，為什么中國(guó)這么一個(gè) 大的一個(gè)***卻做不了。其實(shí)很多技術(shù)的難度都是因?yàn)椤靶　痹斐傻?。芯片之所以難做就是因 為里面的結(jié)構(gòu)要精細(xì)控制到納米尺寸。乒乓球可以很容易通過模具做出來，而要把乒乓球做到 納米和微米范圍的尺度其實(shí)難度是很大的。在微觀尺度下，大家習(xí)以為常的宏觀工具和制作技 術(shù)已完全不適用，需要全新的技術(shù)手段，使得宏觀很容易的事情在微觀變成高不可攀的技術(shù)難 題。當(dāng)然也正是因?yàn)樾?，讓微球材料性能得到大幅度的提升，比如說微球表面效應(yīng)和體積效應(yīng)，一個(gè)乒乓球直徑40毫米，重量2-3克。如果把乒乓球做到直徑40納米微球，由于1毫米是106納米，因此一個(gè)普通乒乓球就可以做出1018個(gè)直徑40納米微球。其表面積有5000多平米，相當(dāng)與5個(gè)足球場(chǎng)大小，同樣重量的40納米微球與40毫米乒乓球相比表面積增加了1012倍，因此納米微杭州質(zhì)量分離純化微球

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