南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究

采用Longa等的5級(jí)4分法標(biāo)準(zhǔn)對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行評(píng)價(jià)，0分：無(wú)神經(jīng)功能缺損癥狀；1分：出現(xiàn)左側(cè) Honer征，輕度神經(jīng)功能缺損；2分：提尾對(duì)側(cè)前肢內(nèi)旋，肩內(nèi)收，中度神經(jīng)功能缺損；3分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈、向?qū)?cè)傾倒，重度神經(jīng)功能缺損；4分：不能自發(fā)行走，部分意識(shí)喪失。鼠側(cè)傾倒，評(píng)分為3分。 沿腦橋上界面切斷，去除嗅球，稱全腦重，立即放入-20℃冰箱， 20 min 后取出，由前向后做連續(xù)冠狀切片（切片厚度2 mm）。將腦切片置入0.1% TTC溶液中，后放入恒溫振蕩器中，37℃避光染色30 min，將腦切片取出后放入固定液中固定 24 h，取出腦片，相機(jī)拍照，用 Motic Images Plus 顯微圖像分析系統(tǒng)計(jì)算腦梗死面積和梗死體積。動(dòng)物疾病模型的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化非常重要，因?yàn)檫@可以確保研究結(jié)果的可重復(fù)性和可比性.南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究

腦卒中具有發(fā)病率高、病死率高、殘疾率高及復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)。其中缺血性腦卒中的發(fā)病率高于出血性腦卒中，占腦卒中總數(shù)的 60% ～ 70%。缺血性腦卒中引起的組織損傷是主要的致死原因，但研究發(fā)現(xiàn)，缺血后再灌注引起的過(guò)量氧自由基是造成組織損傷的主要因素。 通過(guò)制備腦局部缺血再灌注損傷動(dòng)物模型研究腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制已成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。線栓法是*常用的腦局部缺血再灌注損傷模型制備方法，此方法不需要開(kāi)顱且不需要呼吸機(jī)等儀器輔助，缺血部位較恒定，能夠準(zhǔn)確控制缺血及再灌注時(shí)間，容易控制局部條件，全身影響小，是制作腦局部缺血再灌注損傷模型*理想的方法。南京定制腦梗MCAO模型研究方案將動(dòng)物放在一個(gè)旋轉(zhuǎn)的木棒上，觀察動(dòng)物是否能保持平衡，以評(píng)估動(dòng)物的平衡能力和協(xié)調(diào)性。

腦梗MCAO模型成功的評(píng)判方法 生物化學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，檢測(cè)血清中C反應(yīng)蛋白（CRP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等生物化學(xué)指標(biāo)的變化。這些指標(biāo)可以反映炎癥反應(yīng)和缺血損傷的程度，有助于評(píng)估模型的成功。 病理學(xué)檢查：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大腦進(jìn)行病理學(xué)檢查。觀察大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)的細(xì)胞形態(tài)、排列情況，評(píng)估神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度。同時(shí)，通過(guò)免疫組化染色法檢測(cè)神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）的表達(dá)，以評(píng)估神經(jīng)元損傷的程度。 行為學(xué)評(píng)估：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行行為學(xué)評(píng)估，如Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)、步態(tài)分析等。通過(guò)比較不同處理組的行為學(xué)表現(xiàn)，評(píng)估模型的成功。 綜上所述，評(píng)判腦梗MCAO模型成功的標(biāo)準(zhǔn)包括腦梗死面積、神經(jīng)功能缺損評(píng)分、梗死血管、生物化學(xué)指標(biāo)、病理學(xué)檢查和行為學(xué)評(píng)估等方面。只有當(dāng)這些指標(biāo)均符合預(yù)期結(jié)果時(shí)，才能認(rèn)為模型制備成功。

大腦中動(dòng)脈閉塞(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)是缺血性腦血管病的重要類型，是顱內(nèi)動(dòng)脈粥***的晚期。部分患者在疾病進(jìn)展過(guò)程中可能形成間接代償，但如果代償不足，則可能發(fā)生短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)，甚至腦卒中。在患有腦卒中的人群中，大概有三分之一的患者會(huì)發(fā)生死亡，腦卒中的高致死率與其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)己逐漸成為腦卒中的多發(fā)國(guó)家，且新發(fā)腦卒中患者有逐年增加的趨勢(shì)。腦卒中己成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，不僅給國(guó)家和家庭造成了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)還給患者帶來(lái)嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)和勞動(dòng)能力的喪失。小鼠缺血性腦梗死模型在神經(jīng)科學(xué)研究中具有重要意義。

將小鼠進(jìn)行呼吸誘導(dǎo)麻醉（異氟烷）后，以仰臥位固定于操作臺(tái)上，繼續(xù)維持麻醉，常規(guī)消毒，備皮，取頸部正中切口，分離右側(cè)頸部總動(dòng)脈（CCA）、勁內(nèi)動(dòng)脈（ICA）和頸外動(dòng)脈（ECA），結(jié)扎ECA遠(yuǎn)心端，在ECA起始端留置結(jié)扎線，用動(dòng)脈夾將ICA遠(yuǎn)心端、CCA近心端夾閉。在ECA遠(yuǎn)心端結(jié)扎線外離斷，將ECA拉至與ICA成一條直線，于結(jié)扎線近端用顯微剪剪一斜口，將MACO栓線緩緩送入，栓線通過(guò)ECA近心端結(jié)扎線進(jìn)入ICA后，單道結(jié)扎ECA近心端結(jié)扎線，使栓線與血管相對(duì)固定，隨即松開(kāi)ICA上的動(dòng)脈夾，緩慢上提ECA近心端結(jié)扎線，將栓線緩慢送入，進(jìn)線至線栓刻度位置。 缺血后再灌注：栓線插入40 min后拔出，隨后將ECA近心端結(jié)扎線結(jié)扎，松開(kāi)CCA近心端動(dòng)脈夾，碘伏消毒后逐層縫合切口。小鼠缺血性腦梗死模型也為神經(jīng)康復(fù)研究提供了有力支持。南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究

缺血性腦梗死具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率的特點(diǎn)。南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究

缺血性卒中的病理生理及藥物治*缺血性卒中主要誘發(fā)神經(jīng)血管單元（NVU）一系列的缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)（包括興奮性氨基酸毒性，氧（氮）化應(yīng)激和缺血后炎癥等），從而造成神經(jīng)細(xì)胞受損甚至部分死亡細(xì)胞凋亡，*終誘發(fā)大腦功能的異常。NVU是由神經(jīng)元，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，血管細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞）以及基底膜共同構(gòu)成，這些細(xì)胞相互作用，共同調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在細(xì)胞間質(zhì)間的流動(dòng)和腦血流，維持和修復(fù)髓鞘，清*代謝產(chǎn)物，從而實(shí)現(xiàn)和維持大腦的正常功能。在缺血發(fā)生時(shí)，NVU的各部分細(xì)胞發(fā)生不同程度的損傷，誘發(fā)神經(jīng)元細(xì)胞的生理生化異常。部分凋亡細(xì)胞會(huì)進(jìn)展為梗死灶，而梗死灶周圍受損的神經(jīng)細(xì)胞雖然出現(xiàn)了生理生化異常和功能障礙，但尚未死亡，及時(shí)低灌注可能可以改善其損傷狀況使之恢復(fù)正常。這部分及時(shí)搶救仍然可以改善其功能的神經(jīng)細(xì)胞一般被稱為“缺血半暗帶”。南京線栓法腦梗MCAO模型課題研究