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高效液相色譜法介紹

基本原理

高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上，于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻。因為較小的填充顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。

使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，***通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質(zhì)。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，***地應用于化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒有本質(zhì)的差別，它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機化合物。

可支持三個工作流程。雙梯度流路。同一集成式系統(tǒng)。安徽專業(yè)液相色譜系統(tǒng)廠家直銷

高效液相色譜梯度洗脫

類似于GC中的程序升溫。已成為現(xiàn)代高效液相色譜中不可缺少的部分。梯度洗提，就是載液中含有兩種（或更多）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，通過載液中極性的變化來改變被分離組分的分離因素，以提**離效果。梯度洗提可以分為兩種：

a.低壓梯度（也叫外梯度）：在常壓下，預先按一定程序?qū)煞N或多種不同極性的溶劑混合后，再用一臺高壓泵輸入色譜柱。

b.高壓梯度 ( 或稱內(nèi)梯度系統(tǒng) ) ：利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按設定的比例送入梯度混合室，混合后，進入色譜柱。

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高效液相色譜分離原理

離子交換

(Ion-exchange Chromatography)

IEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基于離子交換樹脂上可電離的離子與流

動相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進行可逆交換，依據(jù)這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離。以陰離子交換劑為例，其交換過程可表示如下：

X-（溶劑中） (樹脂-R4N Cl-)=== （樹脂-R4N X-) Cl- （溶劑中）

當交換達平衡時：

KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]

分配系數(shù)為：

DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-]

[討論：DX與保留值的關系]

凡是在溶劑中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來進行分離。

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