廣西小鼠轉(zhuǎn)染試劑

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)**。細(xì)菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導(dǎo)致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過(guò)內(nèi)部DNA修復(fù)過(guò)程促進(jìn)基因編輯。有研究指出，陽(yáng)離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質(zhì)粒的有效遞送。當(dāng)大質(zhì)粒通過(guò)PC傳遞時(shí)，它們可以以高N/P比聚結(jié)并包裹質(zhì)粒;這有效地編輯了兩個(gè)基因組位點(diǎn):血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發(fā)了巨噬細(xì)胞特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cas9表達(dá)質(zhì)粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽(yáng)離子脂質(zhì)輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無(wú)法在靶組織和細(xì)胞中進(jìn)行精確基因編輯的問(wèn)題(CLAN)?；陉?yáng)離子聚合物的基因***在臨床試驗(yàn)中顯示出巨大的潛力，但由于研究仍處于早期階段，目前大多數(shù)研究都處于臨床前階段。研究人員集中研究了將合成t細(xì)胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。廣西小鼠轉(zhuǎn)染試劑

RNA和信使RNA與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過(guò)基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細(xì)胞。與涉及DNA的轉(zhuǎn)染相比，RNA轉(zhuǎn)染可能產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率，因?yàn)楹笳卟恍枰┰胶四?。在不需要基因組整合、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理的情況下，RNA轉(zhuǎn)染也可能加速所需蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達(dá)特定的，所需的蛋白質(zhì)。然而，RNA轉(zhuǎn)染后，蛋白質(zhì)表達(dá)是短暫的，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對(duì)較差，因此在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸時(shí)更容易降解。小RNA是長(zhǎng)度為18-200個(gè)堿基對(duì)(bp)的RNA分子，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA（shRNA）等。microRNAs和piRNAs都是內(nèi)源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過(guò)抑制目標(biāo)mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。與miRNAs和piRNAs類似，siRNA也在調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)中發(fā)揮作用。siRNA的長(zhǎng)度通常為20-24bp，可表達(dá)為內(nèi)源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發(fā)夾環(huán)的內(nèi)源性雙鏈小RNA。shRNA可以結(jié)合mRNA上的互補(bǔ)序列來(lái)降解它。廣西小鼠轉(zhuǎn)染試劑PHP是由天然來(lái)源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的，是一個(gè)用作基因載體的聚酯。

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過(guò)病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動(dòng)子、復(fù)制起點(diǎn)、多個(gè)克隆位點(diǎn)、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個(gè)克隆位點(diǎn)包含獨(dú)特的內(nèi)切酶切割位點(diǎn)，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛?dòng)子(如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會(huì)產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。

化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個(gè)因素，如使用的試劑類型、靶細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì)，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標(biāo)傳遞給非分裂細(xì)胞和分裂細(xì)胞，因此在基因***中非常有用。有幾個(gè)因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率，如靶細(xì)胞類型、使用的啟動(dòng)子類型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項(xiàng)評(píng)估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來(lái)自人類、倉(cāng)鼠、貓、狗、馬和豬的不同細(xì)胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細(xì)胞類型上，使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對(duì)嚙齒動(dòng)物細(xì)胞的***性較弱。在同一項(xiàng)研究中，啟動(dòng)子的類型也被認(rèn)為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個(gè)因素，因此含有替代CMV啟動(dòng)子的內(nèi)部啟動(dòng)子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細(xì)胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。

在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過(guò)不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長(zhǎng)。這些結(jié)果來(lái)源于使用表達(dá)促炎細(xì)胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長(zhǎng)抑制似乎是由CpG基序引起的，因?yàn)檫@些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長(zhǎng)的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一個(gè)恰當(dāng)?shù)睦邮荌L-12的能力，在響應(yīng)含CpG基序時(shí)產(chǎn)生，引發(fā)抗血管生成反應(yīng)。其他細(xì)胞因子，如IFN-g(自身為CpG誘導(dǎo)的細(xì)胞因子)誘導(dǎo)的細(xì)胞因子，即IP10和Mig，也能夠具有抗血管生成特性。不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。天津轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。廣西小鼠轉(zhuǎn)染試劑

作為一般指導(dǎo)原則，建議使用早期傳代的細(xì)胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率，特別是涉及原代或干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。另一個(gè)有趣的觀察結(jié)果是，37℃是可以幫助原代細(xì)胞達(dá)到更高轉(zhuǎn)染效率的比較好培養(yǎng)溫度。這種現(xiàn)象可能是因?yàn)?7攝氏度是哺乳動(dòng)物細(xì)胞的比較好培養(yǎng)溫度。同時(shí)，在轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞時(shí)，化學(xué)轉(zhuǎn)染似乎不如病毒和物理轉(zhuǎn)染有吸引力，尤其是在人類原代干細(xì)胞中。當(dāng)在相似條件下使用相同的轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞系的來(lái)源(如人類與動(dòng)物細(xì)胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項(xiàng)涉及轉(zhuǎn)染人類和大鼠平滑肌細(xì)胞的研究中，大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染大鼠平滑肌細(xì)胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉(zhuǎn)染人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMCs)。廣西小鼠轉(zhuǎn)染試劑