MYeloperoxidase免疫組化IHC

檢測復雜的生物學結(jié)構(gòu)需要較高清晰度的熒光信號，并將熒光信號從背景噪聲中分離開來。標準的免疫熒光標記很少能夠獲得較佳信噪比的成像效果。獲得良好圖片和較佳的可供發(fā)表的高質(zhì)量圖像之間的差異就在于：需要精細調(diào)整樣品信號達到峰值特異性、高清晰度和較佳放大倍數(shù)。雖然熒光基團是進行高質(zhì)量細胞成像的較佳選擇，但不可避免地也極易發(fā)生光漂白，即熒光信號的光化學降解或衰退。任何光敏感度的下降都可能導致數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差，產(chǎn)生假性結(jié)果?？勾銣绶馄瑒┛梢员Ｗo熒光標記蛋白的穩(wěn)定性，維持數(shù)周乃至數(shù)月的圖像信號完整度。免疫熒光技術(shù)可以用于研究藥物的靶點和作用機制。MYeloperoxidase免疫組化IHC

細胞免疫熒光實驗注意事項：1、建議細胞直接種孔板，采用倒置熒光顯微鏡拍照，這樣可以避免然后挑片時造成劃片或細胞片破損以及然后封片可能造成滑片等結(jié)果；2、若實驗室只有正置熒光顯微鏡，則需要將細胞植于細胞爬片。建議直接購買處理過的細胞爬片；若只有普通細胞爬片，可以先將爬片于濃酸（濃酸腐蝕性強，注意操作）或 75% 乙醇浸泡過夜，若用酸浸泡過夜，第二天先用自來水小心沖洗掉爬片殘留的酸液，若用 75% 乙醇浸泡，則不需要此步驟。然后，用洗潔精搓洗爬片，然后用去離子水清洗爬片。置于烘箱 80 ℃ 烘干，再將爬片置于超凈臺造紫外消毒后備用。MYeloperoxidase免疫組化IHC免疫熒光在醫(yī)學診斷中起著重要作用，可以用于檢測病原體、肉瘤標志物等。

免疫熒光通透（目的是使抗體進入胞內(nèi)），0.5%TritonX-100(一種去垢劑，用PBS配制)室溫通透20min（針對胞內(nèi)抗原，若是細胞膜上表達的抗原則省略該步驟）；除了TritonX-100，也可作為通透劑，并且固定后的樣品不需要通透。封閉（減少一抗和二抗與非特異位點進行結(jié)合），通透后用PBS浸洗玻片3次，每次3min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加山羊血清，室溫封閉30min。常用的封閉液包括：與二抗同一來源的血清、BSA或者是羊血清。從封閉開始所有的步驟，一定要注意樣品的保濕，避免樣品的干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。醛類固定的樣品，在用一抗孵育前用含0.3M甘氨酸的封閉液進行封閉。

免疫熒光固定（防止離體組織自溶抗原擴散），固定液包括：有機溶劑（甲醇、乙醇等）；交聯(lián)劑（4%PFA、10%中性福爾馬林），固定液的選擇取決于被研究抗原的性質(zhì)及所用抗體的特性，不過，目前甲醛用的還是較多的，但針對磷酸化的抗體，不適合用甲醛，會導致磷酸蛋白從膜表面轉(zhuǎn)移到胞漿中，故應選擇冰冷的無水甲醇或無水乙醇，同時應注意甲醛會揮發(fā)，在4-8°C不宜儲存太久。固定時間：取決于組合塊的大小和類型，對于大多數(shù)組織，18-24h較為理想，細胞固定時間較短，一般2%的甲醛室溫固定20min即可。以細胞樣品為例：用4%的多聚甲醛固定爬片15min，PBS浸洗玻片3次，每次3min。免疫熒光技術(shù)可以用于研究遺傳疾病和基因表達調(diào)控。

免疫熒光通過抗體與示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原-抗體結(jié)合反應，進而對抗原所在的細胞或組織進行定性或定量。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光，可以看見熒光所在的細胞或組織，利用定量技術(shù)測定含量，從而可對抗原進行細胞定性和定位分析。細胞免疫熒光用途：快速直觀顯示所檢測蛋白的細胞定位。材料與儀器：樣品：貼壁細胞；試劑：4% 組織固定液，PBS，Triton X-100，BSA，熒光二抗，免疫熒光染色二抗稀釋液，抗熒光猝滅封片液，0.25% 胰酶；器材：6/12/24 孔板，細胞爬片（蓋玻片），載玻片，15 ml 離心管。免疫熒光技術(shù)在生物醫(yī)學研究中具有普遍的應用前景。HO-1/HMOX1免疫熒光IF

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細胞遷移和細胞黏附。MYeloperoxidase免疫組化IHC

細胞免疫熒光實驗注意事項：根據(jù)所檢測抗原所在位置來確認是否需要加入 Triton 進行通透。若所檢測抗原表位位于膜蛋白的白外段，則不需要通透；一般 5% BSA 封閉即可達到效果；從加熒光二抗起，后面所有操作步驟盡量避光?？s短在熒光顯微鏡下的觀察時間，1~2 h 為宜。染色后盡快熒光顯微鏡下觀察，若不能可放入 4 ℃ 冰箱避光保存一周。無/弱染色：烤片溫度過高，推薦 56~60 ℃ 1~2 h；一抗是否適用固定液和石蠟切片，使用濃度是否過低，孵育是否時間過短等。MYeloperoxidase免疫組化IHC

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