鼻腔灌洗液外泌體熒光標(biāo)記

目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法，但這些方法混有非常多的雜質(zhì)，必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定，不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機(jī)、無(wú)法進(jìn)行多樣品分析等問(wèn)題。因此外泌體研究相對(duì)困難，需要盡快開(kāi)發(fā)操作簡(jiǎn)單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此，日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過(guò)磷酯酰絲氨酸（PS）法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠，再經(jīng)過(guò)含有EDTA的洗脫緩沖液進(jìn)行分離，提取高純度的完整外泌體。外泌體可以作為生物標(biāo)志物來(lái)對(duì)疾病進(jìn)行檢測(cè)。鼻腔灌洗液外泌體熒光標(biāo)記

瘤在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)不斷地將外泌體釋放到周圍環(huán)境中去，同時(shí)，外泌體能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更長(zhǎng)時(shí)間，可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷。隨著技術(shù)的進(jìn)步，已經(jīng)有生物公司嘗試涉足外泌體領(lǐng)域，外泌體中存在黑色素瘤標(biāo)志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相關(guān)蛋白，且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者，通過(guò)檢測(cè)MIA和S100B表達(dá)水平對(duì)黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質(zhì)上說(shuō)，液態(tài)活檢是分子診斷在樣本來(lái)源上的延伸，進(jìn)一步豐富了檢測(cè)手段，而隨著外泌體的不斷揭秘，相信其會(huì)在液態(tài)活檢中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。血漿血清外泌體提取試劑盒成分神經(jīng)細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子。

研究者利用電穿孔法對(duì)外泌體進(jìn)行DOX的負(fù)載，進(jìn)行體內(nèi)抗中流效果的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，負(fù)載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對(duì)中流的抑制效果遠(yuǎn)優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合，從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護(hù)DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過(guò)量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。

卵巢ai患者與良性卵巢疾病患者血清外泌體中的miRNA表達(dá)譜有明顯差異，表明血清外泌體中的miRNA可以作為卵巢ai活檢的替代診斷標(biāo)志物。多項(xiàng)研究表明外泌體中的miR-21在包括大多數(shù)ai癥的多種病理?xiàng)l件下過(guò)度表達(dá)。尿液外泌體來(lái)源于泌尿系統(tǒng)相關(guān)的各種細(xì)胞，包括腎小球足細(xì)胞、腎小管細(xì)胞和膀胱等，因此尿液外泌體數(shù)目、形態(tài)和生化性質(zhì)的改變往往反映泌尿系統(tǒng)疾病。通過(guò)對(duì)前列腺ai癥患者尿液中的外泌體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，鑒定到兩種已知的前列腺ai癥標(biāo)志物PCA-3(prostatecanceranti[1]gen3，前列腺ai抗原3)和TMPRSS2:ERG(thefusiongeneoftransmembraneproteaseserinestoERG，跨膜蛋白酶絲氨酸與ERG的融合基因)，表明尿液外泌體具有診斷和監(jiān)測(cè)ai癥患者狀態(tài)的潛力?？茖W(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機(jī)制功能。

多項(xiàng)研究表明中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠抑制免疫相關(guān)的信號(hào)通路、阻礙機(jī)體對(duì)中流的免疫響應(yīng)。Chen等研究發(fā)現(xiàn)黑色素瘤細(xì)胞、乳腺ai和肺ai細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生攜帶程序性死亡分子1的配體(programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)的外泌體，此類外泌體在血液中循環(huán)，通過(guò)表面PD-L1與T細(xì)胞結(jié)合，導(dǎo)致T細(xì)胞在到達(dá)中流細(xì)胞之前即受到抑制，達(dá)到遠(yuǎn)程干擾免疫細(xì)胞活性的效果。中流來(lái)源的外泌體能夠抑制骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞(該細(xì)胞是樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)、巨噬細(xì)胞和(或)粒細(xì)胞的前體，具有抑制免疫細(xì)胞應(yīng)答的能力)對(duì)中流的免疫監(jiān)督。中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體與巨噬細(xì)胞共孵育后，其內(nèi)的miRNA-301a通過(guò)下調(diào)抑ai基因PTEN)，激huoPI3Kγ(phosphoinositide3-kinaseγ)信號(hào)分子，使巨噬細(xì)胞被“馴化”成為能參與抗yan反應(yīng)、血管生成以及促進(jìn)中流生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的M2型巨噬細(xì)胞。外泌體分析會(huì)引起何種生理作用，這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。杭州外泌體lncRNA芯片

外泌體被包裹在堅(jiān)硬的雙層膜中，雙層膜保護(hù)外泌體的內(nèi)容物，使外泌體能夠在組織中長(zhǎng)距離移動(dòng)。鼻腔灌洗液外泌體熒光標(biāo)記

流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強(qiáng)反射，操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM)，將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm，能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè)，并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)，目前該儀器已商品化。鼻腔灌洗液外泌體熒光標(biāo)記