腹水外泌體熒光標(biāo)記

卵巢ai患者與良性卵巢疾病患者血清外泌體中的miRNA表達(dá)譜有明顯差異，表明血清外泌體中的miRNA可以作為卵巢ai活檢的替代診斷標(biāo)志物。多項(xiàng)研究表明外泌體中的miR-21在包括大多數(shù)ai癥的多種病理?xiàng)l件下過(guò)度表達(dá)。尿液外泌體來(lái)源于泌尿系統(tǒng)相關(guān)的各種細(xì)胞，包括腎小球足細(xì)胞、腎小管細(xì)胞和膀胱等，因此尿液外泌體數(shù)目、形態(tài)和生化性質(zhì)的改變往往反映泌尿系統(tǒng)疾病。通過(guò)對(duì)前列腺ai癥患者尿液中的外泌體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，鑒定到兩種已知的前列腺ai癥標(biāo)志物PCA-3(prostatecanceranti[1]gen3，前列腺ai抗原3)和TMPRSS2:ERG(thefusiongeneoftransmembraneproteaseserinestoERG，跨膜蛋白酶絲氨酸與ERG的融合基因)，表明尿液外泌體具有診斷和監(jiān)測(cè)ai癥患者狀態(tài)的潛力。外泌體被工程化改造后，具有靶向特定細(xì)胞類(lèi)型或組織的功能。腹水外泌體熒光標(biāo)記

細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱(chēng)為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類(lèi)型的膜囊泡。這些細(xì)胞外囊泡（EVs）表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式，作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡，由大多數(shù)細(xì)胞分泌。在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報(bào)道后，人們對(duì)外泌體的興趣增強(qiáng)，并且觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應(yīng)答。在過(guò)去幾年中，有幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了各種細(xì)胞類(lèi)型的外泌體分泌，并討論了其潛在的生物學(xué)功能。然而，我們對(duì)于EV形成的分子機(jī)制知識(shí)的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索。這篇綜述專(zhuān)注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機(jī)制。成都外泌體熒光標(biāo)記外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

基于免疫細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠介導(dǎo)和調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)中流的免疫反應(yīng)，外泌體在中流免疫zhiliao方面的潛力受到廣fan關(guān)注。其中樹(shù)枝狀細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體包含大量的MHC-多肽復(fù)合物和免疫刺激相關(guān)的分子，能夠激huo相關(guān)的T細(xì)胞，介導(dǎo)體內(nèi)抗中流應(yīng)答，在多個(gè)臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的抗中流療效。Morse等考察了樹(shù)枝狀細(xì)胞外泌體對(duì)非小細(xì)胞肺ai患者的療效。結(jié)果表明，患者對(duì)樹(shù)枝狀細(xì)胞外泌體耐受性良好，1/3患者表現(xiàn)出了對(duì)樹(shù)枝狀細(xì)胞外泌體的T細(xì)胞響應(yīng)，2/4患者自然殺傷細(xì)胞活性得以激huo。

微流控芯片是一種可兼容多種外泌體分離方法的新興檢測(cè)平臺(tái),這些方法包括免疫親和分離、膜過(guò)濾、納米線(xiàn)捕獲、聲納米過(guò)濾和確定性側(cè)向位移分選等。微流控裝置是由幾十到幾百微米的不同直徑微通道網(wǎng)絡(luò)組成的緊湊單元,能夠處理皮升到微升范圍內(nèi)的黏性介質(zhì)樣品;且根據(jù)特定的功能,微通道可以相互連接,使用額外的特定裝置來(lái)微調(diào)流體運(yùn)動(dòng)。微流控技術(shù)能夠以極高的準(zhǔn)確性和特異性在微尺度上重現(xiàn)眾多實(shí)驗(yàn)室過(guò)程,取代昂貴的設(shè)備,基于微流控技術(shù)的電化學(xué)外泌體檢測(cè)芯片已經(jīng)受到廣fan關(guān)注。外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。

外泌體（exosome）是一種由活細(xì)胞分泌的，直徑約為40～160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。它攜帶了分泌細(xì)胞包含的生物活性物質(zhì)，如DNA、miRNAs、mRNA、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNA）、酶、蛋白質(zhì)和細(xì)胞代謝物等。外泌體在細(xì)胞間通信中扮演著十分重要的角色。目前對(duì)于外泌體的研究涉及包括瘤的發(fā)生和發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制、瘤診斷標(biāo)志物以及藥物傳遞系統(tǒng)等諸多方面。外泌體是一個(gè)高度異質(zhì)性的群體，具有獨(dú)特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對(duì)受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來(lái)源來(lái)區(qū)分。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性。高濃度集聚誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的TNF-α，可使類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化。海洋生物外泌體iTRAQ

通過(guò)壓制或去除這些外泌體，有希望壓制疾病發(fā)生。腹水外泌體熒光標(biāo)記

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子，同時(shí)也表達(dá)胎盤(pán)特異性蛋白分子，證明通過(guò)這種方法獲得的外泌體是胎盤(pán)來(lái)源外泌體。通過(guò)蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見(jiàn)各蛋白分子條帶清晰可見(jiàn)，動(dòng)態(tài)光散射分析粒徑，結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻(xiàn)報(bào)道外泌體顆粒大小相一致。胎盤(pán)外泌體經(jīng)過(guò)PKH67熒光染料染色后，與細(xì)胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性，進(jìn)一步驗(yàn)證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤(pán)來(lái)源的外泌體。本研究通過(guò)蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤(pán)來(lái)源外泌體，并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對(duì)其進(jìn)行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤(pán)外泌體在正常妊娠及胎盤(pán)源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。腹水外泌體熒光標(biāo)記

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